Квантификација нуклеинских киселина у спектрофотометрима
Квантификација нуклеинских киселина је најчешће коришћена функција спектрофотометра. Олигонуклеотиди, једноланчна, двострука ДНА и РНА могу се квантификовати у пуферима. Апсорпциони пик највишег апсорпционог врха нуклеинске киселине је 260 нм. Свака нуклеинска киселина има различит молекуларни састав и стога има различите факторе конверзије. За квантификовање различитих врста нуклеинских киселина, претходно одаберите одговарајуће коефицијенте. На пример, апсорбанција 1ОД је еквивалентна 50 μг / мл дсДНА, 37 μг / мл ссДНА, 40 μг / мл РНА и 30 μг / мл Олиг, респективно. Вредност апсорбанције после теста се конвертује преко горњег коефицијента како би се добила одговарајућа концентрација узорка. Пре тестирања изаберите тачан поступак, унесите количину основног раствора и разблаживача и тестирајте празна и узорка. Међутим, експеримент није био лак. Нестабилна очитавања могу бити највећа главобоља за експериментанте. Што је већа осетљивост инструмента, већи је показан апсорбски дрифт.
У ствари, принцип дизајна и принцип рада спектрофотометра омогућавају да се вредност апсорбанције мења у одређеном распону, односно да инструмент има одређени степен тачности и тачности. На пример, Еппендорф биопхотометар тачност ≤ 1,0% (1А). Резултати ових вишеструких тестова варирају од средине од 1,0% и све су нормалне. Осим тога, морају се узети у обзир и физичкохемијске особине нуклеинске киселине, пХ пуфера за растварање нуклеинске киселине, концентрација јона итд. Током тестирања, превелика концентрација јона такође ће довести до читања дрифт као ТЕ, који ће у великој мјери стабилизирати читање. Разблажена концентрација узорка такође је занемарљив фактор: због неизбежног присуства малих честица у узорку, нарочито узорцима нуклеинских киселина. Присуство ових малих честица омета ефект испитивања. У циљу минимизирања утицаја честица на резултате испитивања, апсорбанција нуклеинске киселине је потребна да буде најмање 0,1 А, а апсорбанција је пожељно 0,1-1,5 А. У овом домету не смеју да постоје мехурићи у мешавина, и нема суспензије у празном. У супротном, очитавање се насилно дешава; исти колориметријски шоље се мора користити за тестирање бланко и узорак; иначе, разлика у концентрацији је превелика; коефицијент конверзије и јединица за концентрацију узорка су исти; Кивета носи прозор; запремина узорка мора да достигне више од потребне минималне количине чаше у боји итд.
Поред концентрације нуклеинске киселине, спектрофотометар показује неколико веома важних односа истовремено како би указао на чистоћу узорка, као што је однос А260 / А280, ради процене чистоће узорка, с обзиром да је апсорпциони врх протеина је 280 нм. Чисти узорци имају однос већи од 1,8 (ДНК) или 2,0 (РНК). Ако је однос мањи од 1,8 или 2,0, то указује на присуство протеина или фенолних супстанци. А230 указује на то да у узорку постоје неки загађивачи, као што су угљени хидрати, пептиди, феноли итд. Однос чистих нуклеинских киселина А260 / А230 је већи од 2.0. А320 открива замућеност раствора и друге факторе мешања. Чисти узорак, А320 је углавном 0.
Компанија је специјализована за продају спектрофотометара , добродошлих купаца који имају потребу за консултацијом и куповином, пружићемо вам искрену услугу и квалитетне производе, као и ниже цене.
Е-маил: инфо@сумерлаб.цом
Веб: сумеринструмент.цом