Спектрофотометријска колориметрична квантификација протеина
Протеини су обично мјешавина протеина. Колориметријски тестови се заснивају на саставима протеина: аминокиселине (нпр. Тирозин, серин) реагују са додатном хромогеном групом или бојом да би се произвело обојени материјал. Концентрација обојеног материјала је директно повезана са бројем амино киселина које реагује протеин, чиме се рефлектује концентрација протеина.
Колориметријска метода
Постоји неколико метода као што су БЦА, Брадфорд и Ловри.
Метода Ловри: На основу најраније реакције Биурета и побољшана. Протеин реагује са Цу2 да произведе плаву реакцију. Међутим, Ловриов метод је осетљивији од Биурета. Недостатак је потреба да се секвенцијално додају неколико различитих реагенса; реакција траје дуго; је подложан не-протеинским супстанцама; протеини који садрже ЕДТА, Тритон к-100 и амонијум сулфат нису погодни за овај метод.
Тест бицинхониинске киселине: Ово је новији, осјетљивији протеински тест. Протеин који се анализира реагује са Цу2 у алкалном раствору како би се добио Цу, који формира хелат са БЦА да би се формирао пурпурно једињење са врхом апсорпције на 562 нм. Линијски однос између концентрације овог једињења и протеина је јак, а једињење формирано након реакције је врло стабилно. У односу на Ловри метод, операција је једноставна и осетљивост је висока. Међутим, слично методу Ловри, она је подложна мешању са протеинима и детерџентима.
Метода Брадфорд: Принцип ове методе је да протеин реагује са Цоомассие Бриллиант Блуе да би произвео обојено једињење које апсорбује на 595 нм. Његова највећа карактеристика је његова осјетљивост, што је 2 пута већа од Ловри и БЦА. Једноставније је и брже. Потребно је само једна врста реагенса реакције. Једињење може бити стабилно 1 сат да би се олакшао резултат; Интерферирајући се са Ловри, БЦА реагује са редукционим агенсима (нпр. ДТТ, меркаптоетанолом) компатибилним. Међутим, и даље је осетљив на детерџенте. Главни недостатак је у томе што различити стандарди могу довести до великих разлика у резултатима истог узорка и нема упоредивих резултата.
Неки истраживачи који су први пут изложени колориметријским мерењима могу се збунити резултатима различитих колориметријских тестова. Какве методе верујете да сте збуњени? Због чињенице да су групе реаговале на различите начине, а хромогене групе нису исте, истовремено се користе неколико метода како би концентрације узорака истог узорка биле неконзистентне. На пример, Келлер ет ал. тестирали су протеин у људском млеку и утврдили да су концентрације мерене Ловри-ом и БЦА-ом биле знатно више од оних у Брадфорду. Разлика је била значајна. Чак и ако се одреди исти узорак, стандардни узорак одабран истом колориметријском методом је недоследан, а концентрација након теста је такође недоследна. На пример, користите Ловри за тестирање протеина у хомогенату ћелије, користећи БСА као стандард, са концентрацијом од 1,34 мг / мл и глобулин као стандард са концентрацијом од 2,64 мг / мл. Према томе, пре избора колориметријског поступка, пожељно је да се позову на хемијски састав узорка који се тестира и пронађе хемијски сличан стандардни протеин као стандард. Поред тога, колориметријска метода за квантификацију протеина често доводи до проблема у томе што је вредност апсорбанце узорка прениска, што резултира великом разликом између измерене концентрације узорка и стварне концентрације. Кључно питање је да боја значајног дела 1011 спектрофотометра, кивете, има одређени полу-живот, тако да сваки колориметријски метод наводи време испитивања реакције. Сви узорци (укључујући стандардне узорке) морају бити тестирани у овом времену. Ако је време предуго, добијена вредност апсорбанце постаје мања и претвара се концентрација концентрације. Поред тога, температура реакције, пХ вредност раствора итд. Су сви важни фактори који утичу на експеримент. Поред тога, веома је важно користити пластичну колориметрију. Избегавајте употребу кивета направљених од кварца или стакла, јер боја након реакције изазива обојење кварца или стакла, што резултира нетачном упијањем узорка.
Компанија је специјализована за продају спектрофотометара , добродошлих купаца који имају потребу за консултацијом и куповином, пружићемо вам искрену услугу и квалитетне производе, као и ниже цене.
Е-маил: инфо@сумерлаб.цом
Веб: сумеринструмент.цом